度洛西汀外文翻译资料

 2022-02-14 21:22:21

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Drug-drug plasma protein binding interactions of ivacaftor

度洛西汀是一种有效且平衡的5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取的双重抑制剂,用于治疗抑郁症和尿失禁。在肠溶衣片剂中单次20.2mg（100.6Ci）口服剂量的[ 14 C]度洛西汀后,在四名健康人受试者中研究度洛西汀的处置。312小时后放射性平均总回收率（SEM）为90.5％（ -0.4％）,尿液排出72.0％（ -1.1％）。度洛西汀被广泛代谢成许多代谢物,主要以共轭形式排泄到尿液中。度洛西汀的主要生物转化途径涉及在4-,5-或6-位氧化萘基环,然后进一步氧化,甲基化或缀合。血浆中发现的主要代谢物是以下的葡糖苷酸结合物：4-羟基度洛西汀（M6）,6-羟基-5-甲氧基度洛西汀（M10）,4,6-二羟基度洛西汀（M9）和5-羟基-6-甲氧基度洛西汀的硫酸盐结合物（M7）。血浆中发现的主要代谢物也存在于尿液中,但尿液中含有许多其他代谢物。度洛西汀除了在粪便中观察到4-羟基度洛西汀（M14）和未鉴定的极性代谢物外。施用[ 14 C]度洛西汀后,C max度洛西汀和总放射性均达到中位数6小时。基于曲线下的平均面积,度洛西汀占循环放射性的不到3％。总放射性（120小时）的消除半衰期显着长于度洛西汀（10.3小时）。

度洛西汀是一种有效且平衡的血清素（5-羟色胺,5HT [1][2]）和去甲肾上腺素（NE）再摄取的抑制剂。体内（图1）。度洛西汀在体外和体内研究中均显示出对运输部位的5HT和NE再摄取的相对均衡和有效的抑制作用以及对多巴胺再摄取的弱影响（Pitsikas,2000; Wong,1998）。度洛西汀对毒蕈碱,组胺缺乏显着的亲和力[2]ħ 1,1 -肾上腺素能,多巴胺d 2,5HT 1A,5HT 1B,5HT 1D,5HT 2A,5HT 2C,和阿片样物质受体（Wong等人,1993）。与目前的选择性5-羟色胺再摄取抑制剂相比,对一种以上单胺类神经递质的联合作用可以产生更有利的临床结果（Wong和Bymaster,2002）。动物临床前研究表明,度洛西汀可增强大鼠脑边缘区域5HT和NE的释放（Rueter等,1998）,并且在猫的受刺激的膀胱条件下,增加膀胱容量和尿道周围横纹肌括约肌肌电活动（Thor） ,1995）。基于这些数据,度洛西汀正在存在临床研究用于治疗重度抑郁症和压力性尿失禁。度洛西汀不仅在这两种疾病中显示出疗效,而且已被证明是安全且耐受性良好的（Sharma等,2000; Detke等,2002; Goldstein等,2002; Norton等,2002; ）。在给健康男性受试者施用20,30或40mg剂量时,度洛西汀的平均口腔清除率,表观分布容积和半衰期分别为114升/小时,1943升和12.5小时（Sharma等）。 al2000）。度洛西汀的安全性和药代动力学已在健康受试者中广泛评估。该研究在四名健康参与者中进行,以了解度洛西汀在肠溶衣片剂中单次口服剂量的盐酸度洛西汀后的吸附,处置,代谢和排泄。

材料和方法

参考化合物和化学品。在Eli Lilly and Company合成下列未标记和标记的化合物：盐酸度洛西汀,[ 14 C]度洛西汀盐酸盐和13 CD 3 度洛西汀盐酸盐; 4-,5-和6-羟基度洛西汀（M14,M12和M13）; ntilde; - 去甲基度洛西汀（M23）; 6-羟基-5-甲氧基度洛西汀（M15）; 5-羟基-6-甲氧基度洛西汀（M16）; 噻吩醇（M26）; 二氢二醇度洛西汀（M2）; 4,6-二羟基度洛西汀（6）; 葡糖苷酸结合物4,6-二羟基度洛西汀（M9）; 6-羟基-5-甲氧基度洛西汀（M10）的葡糖苷酸结合物; 5-羟基-6-甲氧基度洛西汀（M7,M3）的硫酸盐和葡糖苷酸结合物; 4和6-羟基度洛西汀（M6,M8）的葡糖苷酸结合物; 和二氢二醇度洛西汀（M1）的葡萄糖醛酸结合物。试剂和溶剂为分析级,并从商业来源获得。

度洛西汀的初级代谢产物的合成。一些度洛西汀代谢物M14至M16的合成是通过将噻吩侧链1与相应的氟萘酚（2至5）缩合而完成的（图2）。

2）。在合成度洛西汀（R 1 R 2 R 3 H）的条件下,羟基被保护为缩酮或缩醛（Wheeler等,1995）。然后用乙酸除去保护基团。通过M14和M15与乙酰溴-D- 葡糖醛酸甲酯的O-烷基化,然后皂化酯基,合成葡糖苷酸结合物M6和M10。通过6的酶促葡糖醛酸化合成化合物M9。通过加入6至2种培养物完成葡萄糖醛酸化, 链霉菌属 和Actinoplanes missouriensis,它们在孵育前用表达（生物转化）培养基制备。将培养物在30℃下以165rpm振荡温育3天,然后过滤并分离。硫酸盐共轭物,M7,合成如图2所示。

学习规划。 这项开放标签的单剂量代谢住院患者研究由四名参与者（三名男性和一名女性）进行,年龄范围为44至48岁（表1）。根据纳入/排除标准,病史,体格检查和方案中列出的其他程序选择研究参与者。在研究开始之前,机构审查委员会批准了该议定书和知情同意书。研究参与者在研究之前给出了书面知情同意书。在研究开始之前,参与者分别在30天或12个月内未参与研究新药或放射性研究新药的施用。在给药之前,还测试了参与者以确定他们对CYP2D6的代谢表型以确定它们是否是差代谢者或广泛代谢者。该研究在印第安纳州印第安纳波利斯印第安纳大学医院和门诊中心的莉莉实验室临床研究中进行。

剂量管理。[ 14 C]盐酸度洛西汀在Eli Lilly and Company（Wheeler等,1995）合成,14 C标记位于分子的手性中心。未标记和标记药物的纯度为99％。

研究药物作为肠溶包衣片剂提供,其含有20.2mg未标记和放射性标记的度洛西汀,活性为约100.6Ci。该材料的比活性约为5Ci / mg。给予剂量180ml水。受试者在给药前一晚的午夜12点禁食,并且在给药后再禁食4小时

生物样品采集。在给药前0.5小时（0小时样品）和约1,2,4,6,8,10,12,16,20,24,36,48,从每个受试者抽取血样（20ml）,在含有肝素钠的Vacutainer管中给药后72,96,120,144,192,216和240小时。离心后获得血浆样品,分析等分试样的放射性。将血浆样品储存在约20℃下,用于将来度洛西汀和代谢物的分析。由于先前已经显示放射性不分配到人血液的细胞部分中,因此在该研究中未分析全血的放射性。

将尿液样品收集在塑料容器中。在给药之前和在以下时间点收集它们：0至4,4至8,8至16,16至24,24至36,36至48,并且每24小时至312小时。将样品储存在冰上直至收集期结束。取等分试样进行放射性分析,将尿样保存在约20℃。

将粪便样品收集在塑料袋中并在加入水后均质化（如果需要,以产生均匀的浆液）。将每个匀浆样品的等分试样燃烧,然后分析捕集的14 CO 2。将剩余的均化样品储存在约20℃的塑料容器中。

从每个受试者收集呼出呼气的样品用于分析14

在给药前约0.5小时内（0小时样品）和在给药后约1,2,4,6,8,10,12,16,20和24小时内的CO 2。受试者呼气进入含有捕获剂（苄索铵氢氧化物）的溶液中,用于收集过期的CO 2和 14 CO 2。

放射分析。通过将Ready Protein （Beckman Coulter,Inc.,Fullerton,CA）液体闪烁混合物添加到已知体积的样品中,制备血浆,尿液和呼出气样品用于分析放射性。使用Packard Tri-Carb液体闪烁光谱仪（型号2300; PerkinElmer Life Sciences,Boston,MA）进行放射性分析。将等份的粪便匀浆称入预先搅拌的燃烧锥中并使其干燥过夜。将样品用PerkinElmer Life Sciences Tri-Carb样品氧化剂（型号307）燃烧,然后在Carbo-Sorb E / Permafluor E （PerkinElmer Life Sciences）中进行液体闪烁计数。[ 14 C]度洛西汀放射等效物,数据采集和存储以及数据的统计处理使用ADME / WINPET系统（Eli Lilly and Co.）应用和经验证的实验室信息管理系统（ADME / LIMS）,基于可用的软件进行包（PerkinElmer Nelson的SQLLIMS; PerkinElmer Instruments,Norwalk,CT）。受试者数量,样品重量或体积,比活性和dpm结果用于确定排泄的剂量百分比。

度洛西汀的分析。使用经验证的LC / MS-MS测定法测定母体化合物的血浆浓度。该测定验证在0.5至100ng / ml的范围内。度洛西汀和稳定同位素标记的内标（13 CD 3 在机器人液体处理系统（Multiprobe 204 Liquid Handling System,Canberra Industries,Pangborne）上使用Ansys Spec Plus 96孔C8提取板（Thames Restek UK Ltd.,Windsor,UK）通过自动固相萃取从血浆中提取度洛西汀盐酸盐。 ,英国）。在加入血浆样品之前,将柱用甲醇调节,然后用水调节。然后将柱用水和60％甲醇水溶液（v / v）洗涤。用100％甲醇洗脱样品,由自动进样器直接注射。使用HI-RPB（30mm,色谱法）分离化合物 3.2mm内径）分析柱（Hichrom Ltd.,Theale,Berkshire,UK）,流动相由55％乙腈/ 45％10mM乙酸铵,pH5（v / v）组成。使用Turbo Ionspray（PerkinElmerSciex Instruments,Boston,MA）在PerkinElmerSciex API III LC / MS-MS系统上分析提取物。使用串联质谱法监测度洛西汀的m / z 298.1344.0和内标的302.1348.0 的转变。分析标准曲线和质量控制样品以及样品。在三次验证运行后,测定的总体百分比CV（精确度）和百分比相对误差（准确度）为8％。当在约20℃或70℃下储存时,度洛西汀在人血浆中稳定至少1年。

代谢物分析和HPLC鉴定。 合并血浆样品并通过用乙腈沉淀或通过使用C8柱（100mg; Varian Medical Systems,Palo Alto,CA）的固相萃取（SPE）萃取。通过加入3ml乙腈沉淀1ml血浆样品,然后离心。将水/有机层转移到硅烷化玻璃管中,在氮气下蒸发,并用50％甲醇/ 50％水（含有0.1％三氟乙酸）（v / v）重构并注入用于分析。使用相同的重建液与所有血浆,尿液和粪便提取物一起使用。放射性的提取回收率约为81％。对于SPE,在真空系统上将1ml血浆加入预处理的C8 SPE柱（1ml甲醇,然后加入1ml水）中。通过药筒缓慢洗脱血浆样品,然后用1ml水洗涤药筒。将代谢物用2ml甲醇洗脱到硅烷化玻璃管中,在氮气下蒸发,并重构用于注射。放射性的提取回收率约为71％。

尿液样品直接注射（对于那些含有大量放射性的样品）或在分析前使用C8 SPE柱提取。对于SPE,使用与血浆所述相同的程序提取1至2ml尿液。放射性的提取回收率约为84％。

通过将1：1的样品和0.2M乙酸盐缓冲液（pH4.7）的1：1混合物在37℃水浴中与含有硫酸酯酶的纤维素酶（来自Helix pomatia的 H-2型）一起温育过夜来水解血浆和尿液样品。然后如前所述处理样品用于分析。

通过向1至2g样品中加入约5ml甲醇来提取粪便匀浆。将样品涡旋,在旋转器上混合约15分钟,并离心。将提取物转移到硅烷化管中,并重复提取步骤。将提取物合并到一个管中,在氮气下蒸发,并重构用于注射。放射性的提取回收率约为81％。

度洛西汀及其代谢物在Discovery C18柱（4.6mm）上分离 150毫米,5米; Supelco,Bellefonte,PA）在通过分析柱之前连接的0.2米预过滤器后。使用梯度分离来分离代谢物。流动相A由5％乙腈和95％水（含有0.1％三氟乙酸）（v / v）组成。流动相B的乙腈含量为75％。梯度由以下步骤组成：0至25分钟,线性梯度从100％A至70％A; 25至35分钟,等度70％A; 35至45分钟,线性梯度至0％A; 45至49分钟,等度0％A; 49至50分钟,线性梯度至100％A; 50至60分钟,等度100％A。HPLC流速为1ml / min。通过UV（232nm）和放射性检测（IN / US-RAM; IN / US Systems,Inc.,Tampa,FL）检测代谢物。无线电探测器使用1,

由于代谢物的数量,后来改进了HPLC流动相和梯度条件以分离在尿液样品中共洗脱的代谢物。流动相A由5％乙腈和

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