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抗菌药物的潜力和化学成分
薇甘菊（Mikania micrantha HBK）
阎立1，沉斌彬2，李俊1,2，袁莉1，王夏霞3和曹成成1*
1中国农业科学院植物保护研究所，北京100193。
2华南农业大学资源与环境学院，广东广州510642
3安徽省农科院，合肥230031，中国。
2013年4月26日接受
通过相关的超声提取方法，用不同极性溶剂制备薇甘菊HBK的地上部分。 筛选抗菌活性测定是针对真菌（Fusarium solani，Phytophthora parasitica Destur，Pythium aphanidermatum和Rhizoctonia solaniKuuml;hn）和细菌（Ralstonia dolaanacearum，Xanthomonas oryzae pv。Oryzae）设计的。 结果表明，叶提取物的生物活性高于茎提取物，氯仿提取物具有最高的生物活性。 还评估了薇甘菊叶子提取物的抗微生物潜力。 结果表明，对于测试的五种真菌，48小时时最大效应（EC50）的50％浓度分别为1313.92,2493.63,1718.97和1084.91mg / l。 发现最小抑制浓度（MIC）值分别对测试的两种细菌分别为250和500mg / l。 气相色谱 - 质谱（GC-MS）分析结果表明，13种化合物占叶片提取物总量的87.03％，1-（4-氯苯基）-2-羟基乙酮（57.44％）为主要化学成分。
关键词：薇甘菊HBK，叶片提取物，氯仿提取物，抑菌效果，抑菌效果，GC-MS分析。
介绍
在农业领域，细菌和真菌感染的治疗仍然是一个重要且具有挑战性的问题，因为包括新发传染病在内的因素以及耐多药微生物植物病原体数量的增加。 尽管使用了大量的抗菌剂，但过去几十年新老抗微生物药物耐药菌株的出现构成了对新型抗菌剂的实质性需求。 已经证明许多来自食用和药用植物，草药和香料的天然提取物具有抗菌性
功能并且作为抗植物病原体的抗微生物剂的来源，例如大蒜素大蒜素（Balestra等，2009），石竹油（Mohammed和AI-Bayati，2008），苦参碱（Guo等，2011）等等上。
薇甘菊（Mikania micrantha）HBK（菊科），俗称一英里一分钟的杂草，是一种极其快速繁殖的多年生爬行杂草。 其原生分布位于热带中部和南美洲。 这种杂草在20世纪40年代被引入印度尼西亚作为地面覆盖物，随后蔓延到太平洋群岛和东南亚。 这种杂草可能会竞争营养物质，光和土壤
与附近植物物种接触，然后杀死植物物种（Huang et al。，2000）。 此外，其猖獗的生长特征和潜在的化感作用效果（Ismail和Kumar，1996）可以破坏大多数本土物种种群（Ismail and Mah，1993），并对自然生态系统和生物多样性造成重大损害。 所以，米兰塔被列为世界上最糟糕的杂草之一。 通过查阅文献，已经从微小麦（M. micrantha）中分离出倍半萜类化合物，黄酮类化合物，多酚类，倍半萜内酯类（Huang et al。，2009）。 通常被称为#39;guaco#39;的微小叶螨的叶子被用来制作蛇咬伤和蝎子st疮的药膏，叶子的水煎液被用来洗牙膏中的皮疹，皮肤瘙痒，脚气和伤口敷料（Ayensu ，1981）。 更具体地说，已知微小lt;br/gt;假单胞菌的叶和茎的提取物对多种微生物有活性，包括革兰氏阴性菌和革兰氏lt;br/gt;阳性菌
（Ghosh等人，2008; Wu等人，2007），特别是关于微小孢子菌抗微生物活性的若干参考文献
真菌分析方法
使用抑制菌丝生长方法测试提取物的真菌活性。 用二甲基亚砜（DMSO）以不同浓度制备提取物，并根据需要用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）稀释。 将PDA培养基分别倾倒入Petri培养皿（9cm直径）作为铺板。 从以前的所有测试真菌菌株的培养物中取出真菌接种物（直径6mm）的琼脂塞，并将其颠倒放置在培养皿的中心。 分别加入等量的用于代替提取物的DMSO和蒸馏水; 电镀作为对照和空白试验。 每个处理都进行三次重复。 所有材料在121℃下高压灭菌30分钟。 真菌菌落的平均直径是通过在28℃下用卡尺进行十字交叉法测量的，并且根据等式[1]中的下式计算生长抑制率。 用概率值分析法计算毒性回归方程，最大效应50％浓度（EC50），置信区间95％。
控制（diam） - 处理（diam）
抑制率（％）= times;100 %
针对一些植物病原体可参见文献Zhuang et al。 （2010）和Hao等人 （2007年）。 薇甘菊的抗菌活性被分配到许多倍半萜内酯化合物中
抗菌测定方法
控制（diam）
(1)
也已经显示出以纯形式显示出抗菌或抗真菌活性（Bakir等，2004）。
我们在这里报告系统筛选广泛的抗菌剂，旨在调查其对四种参考真菌，立枯丝核菌Kuuml;hn，寄生疫霉，镰刀菌solani，Pythium aphanidermatum和两种参考细菌，Ralstonia dolaanacearum，Xanthomonas oryzae pv。 霉。 另外，使用GC-MS确定关于微小蜂的提取物的主要化学成分。 该项目是植物保护提供者未来研究和实用实用工具的跳板。
材料和方法
材料
植物材料：2011年4月，在中国广东省东莞市收集薇甘菊叶片。 该样本由肖小义教授确定。 一份认证凭证样本（编号020701）存放在中国科学院华南植物研究所，广州和中华人民共和国的植物标本馆。
四种参考真菌和两种参考细菌，立枯丝核菌Kuuml;hn，寄生疫霉，脱落镰刀菌，瓜果腐霉，杜氏利斯特氏菌和黄单胞菌。 在研究期间使用了Oryzae。 供试菌株获自中国农业科学院植物保护研究所。 将真菌在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）中在28℃下温育72小时，并在4℃下保存在平板中。 将测试的细菌菌株在27℃下在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（PBA）中培养，并在4℃下储存在营养琼脂斜面上。
使用圆盘测定提取物的抑菌效果
方法（Liu等人，2006）。 为此，将测试的菌株在37℃下接种在BPA培养基平板上24小时。 将菌落悬浮在2ml无菌水中，然后在涡旋混合器上摇动几分钟，以均匀分布。 使用UV光谱仪将悬浮液调整至约107CFU / ml（菌落形成单位/ ml）（OD610= 1.0），并通过细菌计数装置进行确认。 用50℃的培养基（BPA）将悬浮液稀释100倍。 将五毫升（5毫升）稀释的悬浮液（105CFU / ml）加入培养皿（直径9厘米）的15毫升固化BPA培养基的表面。 用DMSO制备不同浓度的提取物，根据需要用蒸馏水稀释。 将灭菌的牛津杯（phi;5mm）放在培养基上并装满200mu;l提取物。 使用等量的DMSO和蒸馏水作为对照和空白。 每个平板在37℃孵育12小时。 每个处理都进行三次重复。 将所有实验材料在121℃下高压灭菌30分钟。 通过测量透明抑菌圈对测试菌株的直径来评估抗微生物活性。 结果以相同处理的独立实验的三次重复的平均值plusmn;标准偏差进行测量。
最小抑菌浓度（MIC）法的测定
采用国家临床实验室标准委员会推荐的肉汤微量稀释法（NCCLS，1997,1999）评估提取物的MIC。 从24小时Mueller-Hinton肉汤（MHB）培养物中制备微生物的接种物，并用相当于0.5McFarland标准的浊度调节悬浮液。 悬浮液在无菌MHB中进一步稀释1:10以获得5times;105CFU / ml的最终接种物。 通过分配180来制备96孔圆底无菌板
将接种过的肉汤加入每个孔中。 加入20mu;l等分部分的提取物。 测试提取物的浓度为50.0,100.0,250.0,500.0和1000.0mg / ml。 氨苄青霉素的稀释
表1.M。micrantha提取物的抑制真菌活性的筛选结果。
|
空中部分 |
经测试 真菌菌株 |
抑制率（％） |
|||||
|
时间（小时） |
甲醇 |
乙酸乙酯 |
丙酮 |
氯仿 |
石油 醚 |
||
|
立枯丝核菌 库恩 |
48 |
27.2358plusmn;0.7937 |
56.0976plusmn;0.2778 |
71.1382plusmn;0.2438 |
72.4390plusmn;0.2252 |
6.300plusmn;0.7937 |
|
|
72 |
0 |
19.6970plusmn;1.9048 |
57.7178plusmn;0.7852 |
78.6458plusmn;0.8718 |
0 |
||
|
96 |
0 |
0 |
37.6849plusmn;0.7330 |
78.9672plusmn;1.1894f |
0 |
||
|
寄生疫霉德斯图 |
48 |
0 |
69.3237plusmn;0.0260 |
73.7923plusmn;0.2264 |
65.5193plusmn;0.1333 |
0 |
|
|
72 |
0 |
66.5645plusmn;0.6586 |
73.9190plusmn;0.5341 |
52.826plusmn;0.3629 |
0 |
||
|
离开 提取 |
96 |
0 |
74.0798plusmn;0.3069 |
77.2810plusmn;1.0537 |
61.9983plusmn;0.2990 |
0 |
|
|
48 |
15.1211plusmn;0.5460 |
83.7510plusmn;0.0285 |
83.9181plusmn;0.2836 |
89.3484plusmn;0.3153 |
4.7201plusmn;1.0388 |
||
|
茄科镰孢 |
72 |
10.8934plusmn;0.5321 |
49.9883plusmn;0.0523 |
76.4404plusmn;0.5412 |
70.9354plusmn;0.9862 |
0 |
|
|
96 |
18.1894plusmn;0.1667 |
51.1883plusmn;0.5391 |
71.9814plusmn;0.9411 |
70.1182plusmn;0.1701 |
0 |
||
|
Pythium aphanidermatum |
48 |
35.2120plusmn;0.1894 剩余内容已隐藏，支付完成后下载完整资料
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