新鲜的西葫芦、蒌叶和加工叶片的抗氧化，抗酪氨酸酶和抗菌性能外文翻译资料

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新鲜的西葫芦、蒌叶和加工叶片的抗氧化，抗酪氨酸酶和抗菌性能

陈婉娴，Eric Wei Chiang Chann

UCSI大学应用科学学院，56000，马来西亚吉隆坡蕉赖

文章信息

文章历史：

收到2013年9月30日

收到修订后的形式2014年2月16日

接受2014年3月10日

摘 要

在本研究中，分析并评价了西葫芦（腰果）和蒌叶（槟榔）的新鲜叶和加工叶的抗氧化，抗酪氨酸酶和抗菌性能。为了评估总酚含量，总黄酮含量，咖啡酰奎宁酸含量，自由基清除活性，还原铁和铁离子螯合能力的抗氧化性能（AOP），Folin-Ciocalteu，氯化铝，钼酸盐，DPPH自由基清除，铁氰化钾和铁锰测定。使用各自的改良多巴色胺法和圆盘扩散法测定抗酪氨酸酶和抗菌性能。新鲜腰果的优异AOP远远超过了槟榔叶，包括迷迭香，百里香和马郁兰这些温和烹饪草本植物。热烫导致腰果和槟榔叶的AOP显着下降，酚类化合物浸入热烫的水中。腰果的微波处理叶的AOP保持不变，但槟榔叶显着增加。新鲜腰果叶片的酪氨酸酶抑制率高，而槟榔叶表现出酪氨酸酶活性的增强。热烫不影响腰果叶片的酪氨酸酶抑制，但微波处理显着增加。对于槟榔叶，酪氨酸酶抑制保持不变。结果表明，新鲜的腰果和槟榔叶抑制了革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的检测。热烫和微波处理的腰果叶表现出强烈的抗菌活性，槟榔叶显示出不同的效果。腰果叶热烫水分也具有抗菌活性。提高槟榔叶片的酪氨酸酶活性，并将具有抗氧化和抗菌性能的生物活性化合物浸出到热烫水中进一步进行调查。

关键词

腰果 槟榔 热烫 微波 酚醛含量 抗氧化活性

1. 介绍

热带烹饪草本植物或乌拉姆经常在马来西亚，泰国和印度尼西亚等东南亚国家消费。作为配菜或作为特制菜肴的成分，相信定期摄取的乌拉姆可以帮助预防退行性疾病，延缓衰老和改善一般健康（Sulaiman，Sajak，Ooi，Supriatno，＆Seow，2011; Reihani ＆Azhar，2012）。 用作食用的草药是腰果和槟榔叶。

西葫芦（漆树科），或腰果是一个小尺寸的树具有圆顶形的冠（LIM，2012）。 树皮是棕色或灰色的，纵向裂缝。 叶片简单，交替，狭窄至宽倒卵形，具圆形顶点。 年轻时，它们柔韧而微红，成熟时呈深黄绿色，突出的像皮革的黄色叶脉。 传统上腰果叶还被用于治疗风湿性疾病和高血压（Andarwulan et al。，2012; Nugroho，Malik，＆Pramono，2013）。

蒌叶（槐属）或槟榔是一种木本，多年生和雌雄异株的藤（Teo＆Banka，2000）。 茎在节点处肿胀。 叶子是交替的，简单的，黄绿色到明亮的绿色，有2或3对次生静脉。 槟榔叶是一种特殊类型的乌拉姆，最著名的是槟榔的必需成分，包括用新鲜的槟榔叶子包裹的白菜坚果片，加入熟石灰，烟草或香料加入调味料（Rai et al。，2011）。 槟榔叶能够改善口臭，改善发声，硬化口香糖预防消化不良，支气管炎，便秘，充血，咳嗽和哮喘 据报道，该物种具有抗微生物，杀虫，抗氧化，抗感冒，抗糖尿病，胃保护和抗凝血性质（Arambewela，Arawwawala和Rajapaksa，2006）。

虽然热带烹饪草本植物的抗氧化性能得到了很好的研究，但对其他生物活性的了解甚少。 不同加工方法的效果也很差。 我们研究的目的是分析和评估腰果和槟榔新鲜和加工叶的抗氧化，抗酪氨酸酶和抗菌性能。

1. 材料和方法

2.1草本植物

西葫芦和蒌叶的新鲜叶子（图1）购自吉隆坡的Chow Kit市场。 年轻的腰果叶是柔韧而红的，而槟榔叶是明亮的绿色和心形的2或3对次生静脉。

图一：新鲜的西葫芦叶片（左）和蒌叶叶片（右）

2.2萃取

对于抗氧化性能，将新鲜草本植物（1g）和加工的草本植物（0.3g）放入研钵中用液氮粉碎，并在室温下加入50mL甲醇连续摇动提取，持续摇动1小时。 提取物在抽吸下过滤并在4℃下储存用于进一步分析。

对于抗酪氨酸酶和抗菌活性，将新鲜草本植物（10g）和加工草本植物（3g）在研钵中用液氮粉碎并用100mL甲醇萃取，每次3次，每次1小时。 在轨道振荡器中连续旋转后，将提取物过滤并在4℃下储存用于进一步分析。

2.3草本植物加工

通过将1g样品浸入50mL沸水中30s将草药弄湿。 将保留在筛上的热烫样品擦干并萃取，同时保存热烫水用于酚含量的分析。草本植物的微波处理包括将1g样品置于微波炉（230-240V，50Hz）中心位置30秒。

2.4抗氧化测定

使用Folin-Ciocalteu，氯化铝和钼酸盐测定法分析了新鲜和加工的草本酚类物质（总酚含量，总黄酮含量和咖啡酰奎宁酸含量），如Chan，Kong，Yee，Chua和Loo （2012a，2012b）。 使用DPPH自由基清除，铁氰化钾和铁锌测定，按照Chan等人的程序测量抗氧化活性（自由基清除活性，降低铁的功率和亚铁离子螯合能力）。（2012年）。

使用Folin-Ciocalteu（FC）测定评估总酚含量（TPC）。 将提取物（300mu;L）引入用铝箔包裹的试管中，然后加入1.5mL FC试剂（10次稀释）和1.2mL碳酸钠（7.5％，w / v）。 在黑暗中培养30分钟后，在765nm处测量吸光度。 TPC以每100g样品的mg表示为没食子酸当量（GAE）。

使用氯化铝测定评估总黄酮含量（TFC）。 将提取物（1mL）加入含有4mL水的试管中。 随后，加入0.3mL 5％亚硝酸钠，然后加入0.3mL 10％氯化铝。 然后加入氢氧化钠溶液（2mL，1M），然后加入2.4mL水至10mL。 将混合物充分混合，并在室温下培育10分钟。 对于空白对照，吸取1mL样品加入9mL水，在415nm下测定吸光度。 TFC表示为mg / 100g样品中的槲皮素当量（QE）。

使用钼酸盐测定法定量了CFAA奎尼酸含量（CQAC）。 通过将16.5g钼酸钠，8.0g磷酸氢二钾和7.9g磷酸二氢钾溶于1L水中制备钼酸盐试剂。 将试剂（2.7mL）加入到植物提取物（0.3mL）中，混合并在室温下温育10分钟。 对于空白对照，0.3mL样品提取物加2.7mL水，在370nm测量吸光度。 CQAC以mg绿原酸当量（CGAE）/ 100g样品表示。

使用2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）测定法测量自由基清除（FRS）活性。 将不同稀释度的萃取液（1mL）加入到2mL DPPH（5.9mg / 100mL甲醇）中。 30分钟后，在517nm测量吸光度。 IC50以抗坏血酸当量抗氧化能力（AEAC）表示，mg抗坏血酸（AA）/ 100g样品。 AEAC计算为IC50（a）/ IC50（s）105（例如抗坏血酸），其中的抗坏血酸IC50为0.00387mg/mL。

使用铁氰化钾测定法测量减少铁的功率（FRP）。 将不同稀释度的萃取液（1mL）加入到2.5mL磷酸盐缓冲液（0.2M，pH6.6）和2.5mL铁氰化钾（1％，w / v）中。 将混合物在50plusmn;1℃下培育20分钟。 加入三氯乙酸溶液（2.5mL，10％，w / v）后，将混合物分成2.5mL等分试样，用2.5mL水稀释。 向每个稀释的等分试样中加入500mL氯化铁溶液（0.1％，w / v）。 30分钟后，在700nm测量吸光度。 FRP以mg GAE / 100g表示。 没食子酸的校准方程为y = 16.767x（R² = 0.9974），其中y为吸光度，x为以mg / mL为单位的GA浓度。

亚铁离子螯合（FIC）能力使用铁蛋白测定法测定。 将不同稀释度的萃取液（1mL）与FeSO 4（0.1mM，1mL），然后加入铁锌（0.25mM，1mL）混合。 10分钟后在562nm测量吸光度。 计算提取物螯合亚铁离子的能力为螯合效应（％）=（1—Asample / Acontrol）times;100。FIC能力以mg / mL表示为螯合效率浓度（CEC₅₀），即亚铁离子螯合50％时提取物的有效浓度 。

2.5酪氨酸酶抑制

按照Masuda，Yamashita，Takeda和Yonemori（2005）和Chan等人的方法，使用修饰的多巴色素法以L-3,4-二羟基苯基-9-（L-DOPA）为底物测定草药的酪氨酸酶抑制。（2008年）。 在96孔微量滴定板中进行测定，并使用平板读数器测量475nm处的吸光度，以700nm为参考。 将样品溶解在二甲基亚砜（DMSO）中。 每个孔含有40mL样品，含有80mL磷酸盐缓冲液（0.1M，pH6.8），40mL酪氨酸酶（31单位/ mL）和40mL L-DOPA（2.5mM）。 每个样品伴随着一个空白，除了L-DOPA以外的所有组分。 将结果与由50％DMSO代替样品组成的对照进行比较。 酪氨酸酶抑制计算为（Acontrol—Asample）/ Acontrol times;100％。

2.6.抗菌活性

使用Chan，Kong，Yee，Chua和Loo（2012a，2012b）所述的盘扩散方法评价草本植物提取物的抗菌活性。 短芽孢杆菌革兰氏阳性杆菌，藤黄微球菌和葡萄球菌和大肠杆菌革兰氏阴性细菌的琼脂培养物，制备铜绿假单胞菌和肠炎沙门氏菌。使用无菌棉签将接种物（100mu;L）均匀地铺展在90mm培养皿中的20mL Mueller-Hinton琼脂培养基上。 使用微量移液管将灭菌纸盘（直径6mm）从2.0mg /碟开始，植物提取物的量每份减少一半，并将其牢固地置于接种的琼脂上，确保均匀分布以避免区域的重叠。 在37℃下培育过夜后，注意到显示抑制区所需的最小抑制剂量（MID）或以mg /盘提取物的最小浓度。

2.7统计分析

所有实验一式三份（n = 3），结果表示为均值plusmn;标准偏差（SD）。 基于P0.05的显着性差异，使用Tukey诚实显着差异（HSD）检验分析方差分析（ANOVA）。

3 结果和讨论

3.1抗氧化性能

基于酚类含量和抗氧化活性的抗氧化性能（AOP）西葫芦新鲜叶远远高于蒌叶的（表1）。 基于TPC（3890plusmn;336mg GAE / 100g），TFC（347plusmn;48mg QE / 100g）和CQAC（1090plusmn;70mg CGAE / 100g）的腰果叶酚含量分别是槟榔的5.8,5.1和5.7倍。 基于AEAC（6620plusmn;513mg AA / 100g），FRP（3260plusmn;235mg GAE / 100g）和CEC₅₀（1.9plusmn;0.2mg / mL）的抗氧化活性是槟榔的抗氧化活性的7.1,7.2和2.6倍。 西葫芦叶的AOP值显著高于温和的烹饪草本植物，如由陈，孔，蔡，洛（2012a，2012b）报道的迷迭香属（迷迭香），寻常的百里香属（百里香）和洋甘菊（墨角兰）。

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