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鹅掌楸杂交种体细胞胚胎萌发条件的优化

摘要 体细胞胚胎发育是植物育种的关键技术。为了获得最佳的培养条件，优化了影响碘代杂种体细胞胚胎萌发和移植存活率的因素，包括体细胞胚胎的发育期，大量元素、维生素C、基因型、植物激素和移植培养基。结果表明，萌发的最佳发育阶段是鱼雷状胚胎，而且3/4MS的基础培养基加维生素C可以使体细胞胚胎保持正常形态。 体胚发芽率有明显的基因型差异，其中杂种1times;5002最敏感(82.46%)，且杂交1times;4088是最不敏感的(13.24%)。含有0.1mg/L KT和0.1mg/L IBA的培养基有助于促进体细胞胚胎的萌发。另外，黄壤比混合泥炭土更适合移栽鹅掌楸杂交幼苗。 因此，最优条件的获得对鹅掌楸生产实践具有重要的指导意义。

关键词 鹅掌楸杂交；体细胞胚胎；发芽

1.引言

体细胞胚胎发生被认为是育种木本植物[1]最有效的生殖方法。 近年来，许多学者对植物体细胞胚胎发生[2-4]的机制进行了广泛的研究，并成功地建立了几种重要的木本植物的育种体系，包括杂交鹅掌楸[5]、落叶松[6]和马尾松[7]。 体细胞胚育苗的萌发率是影响鹅掌楸杂交种在工厂化生产过程中胚胎发生技术的关键因素。 然而，关于这一效应的研究还很少。 因此，我们进行了一个实验，以优化影响鹅掌楸杂交胚胎发芽大规模生产的因素。

2.材料和方法

2.1 实验材料 由南京林业大学森林遗传学与生物技术重点实验室诱导的六种基因型的周期内杂交胚胎实验材料。 诱导鹅掌楸体细胞胚的具体程序包括诱导胚性愈伤组织，调节胚胎细胞愈伤组织，发育体细胞胚胎和植株再生[8-9]。 获得的早期子叶胚胎的基因型包括这些基因型: 1 times; 5002， 1 times; 4088，1 times; 4036，1 times; 7006，1 times; 4006，3 times; 6013．

2.2 发展阶段 根据发育情况

收到：2018年10月4日接受：2018年12月12日，江西省自然科学青年基金项目(20171BAB-214024)；南昌师范学院博士研究项目(NSBSJJ2015036)；南昌师范学院“11531”项目计划。 *提交人。 电子邮箱：shengwentao2003@163.com杂交鹅掌楸（基因型1times;5002)，体细胞胚胎分为鱼雷型胚胎、早期子叶胚胎、成熟子叶胚胎(形态上表现为胚叶变绿，下胚轴伸长明显）。．

2.3 激素组合 对1times;5002型杂交早子叶胚进行了激素组合设计，包括6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、宁(K T)、吲哚乙酸(NAA)和吲哚丁酸(IBA)。

2.4 基质中大量元素和维生素C T将1times;5002杂种的早期子叶胚胎放入MS，3/4MS，1/2MS，1/4MS和维生素C(V c)组合的培养基中。 根据实验特点，其他培养基为3/4MS卡拉胶(7g/L)su-crose(30g/L)，pH5。 6-5. 八，培养温度（25plusmn;2）℃，光照周期(14h/d)，光照强度(2000Lx)。 一个月后，用三个重复计数杂交胚苗的成活率。

2.5 移植方法 杂交体胚苗生根时移栽，茎长2-3cm。 比较了黄壤和泥炭土的移栽方法。 在每个实验中，100株植物被移植，在一个月后计算成活率。

2.6 统计分析 所有数据均采用SPSS17.0微软程序进行统计分析。 用1%概率水平(Plt;0.01)的所有数据平均值进行方差分析(ANOVA).

3.结果

3.1 发展阶段 结果（表1）表明，鱼雷胚胎发芽率为76.32%，伴有强健的小植株长茎抽运，叶片形态正常；早期子叶胚种子出苗率为60.02%，产生少量畸形幼苗，表现有畸形叶片、下胚轴玻璃化和大量愈伤组织的出现；同时，成熟子叶胚苗的发芽率最低(只有23. 73%)，并有严重的玻璃化，叶片畸形和大量愈伤组织产生。 因此，鱼雷胚胎已被证明是更好的发芽周期内鹅掌楸杂交胚胎。

文涛盛等人。 鹅掌楸杂交种体细胞胚胎萌发条件的优化 71

表1不同阶段体细胞胚胎萌发能力的比较

注：三个组合的数据有一栏，然后是不同的小（大写)字母，这三个组合在5%(1%）概率水平上有显着性差异。 表2和表3中的情况相同。．

3． 2 子叶胚胎的基因型 在相同条件下，几种体细胞EM-Bryos基因型之间的萌发能力不同(图1. 1). 基因型1times;5002的种龄率最高为84.26%，其次是3times;6013，成苗率为67.14%，最低为1times;4088，出苗率仅为13. 24%。 基因型1times;4088，1times;4036和1times;7006的苗率在35%以下，属于困难苗型；基因型1times;4036和3,613的苗率为52.02%和67.14%分别属于中间苗型；1times;5002基因型属于易苗型。．

3． 3 激素组合对叶胚萌发能力的影响 不同激素组合的对比实验（表2）表明，在6-BA和IBA的组合中，组合2成苗率最低(48.78%)，组合5的发生率最高(65.21%)；在6-BA和NAA的组合中，组合3最高(45.26%)，表明6-BA和IBA促进体细胞胚胎的萌发，明显优于6-BA和NAA的组合；在KT和IBA的组合中，组合10的幼苗百分比最高(84.61%)，最低的是组合12(68.27%）在KT和NAA的组合中，组合11的幼苗百分比较高(70.88%)，最低的是组合16(50.36%).

图1 子叶胚对种子萌发基因型的比较

表2 6-BA、KT和NAA、IBA对体细胞胚胎萌发不同组合的影响

因此，在IBA中培养的鹅掌楸杂交小苗的萌发优于NAA。 而KT比6-BA更有利于促进胚胎萌发。．

所以最优激素组合为0.1mg/LKT 0.1mg/LIBA，用于鹅掌楸杂交体苗萌发。

72 亚洲农业研究 2018

3． 4 宏观元素和Vc对子叶胚胎萌发能力的影响 结果表明，3/4MS培养基最适合体细胞胚萌发，苗率达84.26%. 其中的大元素

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